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Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(去垢劑兼容型)
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摩爾濃度計(jì)算器
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Bradford蛋白濃度測(cè)定方法，是常用的經(jīng)典蛋白濃度檢測(cè)方法，在酸性條件下，考馬斯亮藍(lán)G250染料能與蛋白質(zhì)的堿性和芳香族氨基酸迅速結(jié)合，可通過檢測(cè)溶液595nm處吸光值，計(jì)算蛋白質(zhì)濃度，吸光值與蛋白質(zhì)濃度在一定范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。經(jīng)典Bradford法與BCA法相比，可以兼容更高濃度的還原劑，并且檢測(cè)速度極快，但卻無法兼容蛋白提取時(shí)常用的去垢劑，而本試劑盒在保留Bradford法原有優(yōu)點(diǎn)的同時(shí)，能夠兼容各種常用去垢劑。

本試劑盒Bradford檢測(cè)試劑溶液呈綠色，在與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，顏色隨蛋白濃度增加而逐漸加深。本試劑盒在測(cè)定蛋白質(zhì)濃度時(shí)，可以兼容濃度1% SDS、1% NP-40、1% Triton X-100、1% Brij35和1% Tween 20等多種去垢劑，而且兼容我公司現(xiàn)有的所有蛋白裂解液。本試劑盒經(jīng)過精心優(yōu)化，可在上述去垢劑存在條件下，蛋白質(zhì)樣品或者標(biāo)準(zhǔn)品BSA濃度在0.1-0.5mg/ml范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值可在0.995以上。


產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

兼容性好，可兼容常用去垢劑和蛋白裂解液

結(jié)果穩(wěn)定，1小時(shí)內(nèi)都可以進(jìn)行檢測(cè)

快速檢測(cè)，5分鐘即可完成蛋白定量時(shí)間

結(jié)果準(zhǔn)確，線性相關(guān)性好，斜率高


實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

 


圖1. 上圖是在去垢劑和蛋白裂解液存在時(shí)，蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)際檢測(cè)結(jié)果。線性良好標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值可在0.995以上。


 


圖2.上圖是RIPA強(qiáng)蛋白裂解液稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，每隔5min檢測(cè)吸光值結(jié)果。結(jié)果表明本產(chǎn)品在1小時(shí)內(nèi)的吸光值變化很小。


保存條件

 4℃保存，一年有效。標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液BSA長(zhǎng)期不用可放置在-20℃保存。


注意事項(xiàng)

1. 當(dāng)去垢劑濃度大于1%時(shí)，部分去垢劑和去垢劑組合仍然適用于Bradford蛋白定量試劑（去垢劑兼容型），但可能會(huì)出現(xiàn)斜率降低的現(xiàn)象，影響結(jié)果準(zhǔn)確度。

2. 本產(chǎn)品長(zhǎng)時(shí)間不用會(huì)有少量沉淀產(chǎn)生，在使用前請(qǐng)將檢測(cè)試劑上下翻轉(zhuǎn)混勻。

3. 本產(chǎn)品建議蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍是0.1-0.5mg/ml，如果因?qū)嶒?yàn)需要擴(kuò)大蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍后出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不好的現(xiàn)象，可將蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和蛋白樣品與檢測(cè)試劑的體積比例改為5:300。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


操作步驟

1. 制備蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液

將20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液按照下表進(jìn)行稀釋，注意在稀釋時(shí)盡量保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液與待檢測(cè)蛋白樣品的溶劑相同，在稀釋時(shí)要保證每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液都充分混勻。以下表格內(nèi)的體積適用于96孔酶標(biāo)板測(cè)定，如使用分光光度計(jì)測(cè)定，按實(shí)際需要擴(kuò)大溶液體積。

編號(hào)

稀釋液體（ul）

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液體積

最終濃度（mg/ml）

A

97.5

從蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液BSA取2.5ul

0.5

B

20

從A管取80ul

0.4

C

20

從B管取60ul

0.3

D

20

從C管取40ul

0.2

E

20

從C管取20ul

0.15

F

20

從D管取20ul

0.1

G

20

0

0


2. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)和蛋白樣品濃度測(cè)定

1) 取10ul上步驟已稀釋好的不同濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液依次加入到96孔酶標(biāo)板中；

2) 取10ul待測(cè)蛋白樣品加入到96孔酶標(biāo)板中。注意如蛋白樣品濃度過大，需要用同蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液相同的溶液稀釋蛋白樣品。

3) 每孔加入300ul Bradford蛋白定量試劑（去垢劑兼容型）。用手輕彈酶標(biāo)板混勻，室溫放置3-5min，注意不可以使用酶標(biāo)儀震板功能，防止液體灑出污染機(jī)器。

4) 設(shè)置酶標(biāo)儀測(cè)定595nm的吸光值，以不含BSA的吸光值做為空白對(duì)照。

5) 以蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，注意將零點(diǎn)去除，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性公式及R2值。

6) 按照上述步驟所得公式，根據(jù)所測(cè)得的蛋白樣品吸光值，計(jì)算蛋白樣品的濃度。

7) 如使用分光光度計(jì)測(cè)定，可根據(jù)實(shí)際需要擴(kuò)大溶液體積，保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和蛋白樣品與Bradford蛋白定量試劑的體積比為10:300，例如，如果需要1.5ml，可取蛋白樣品50ul，Bradford蛋白定量試劑1.5ml。

我司所售出產(chǎn)品僅供于科研研究用途（非臨床科研研究），每次銷售產(chǎn)品行為都適用于我司網(wǎng)上所列明的通用銷售條款。

英文名字：Detergent Compatible Bradford Assay Kit
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：Meilunbio
請(qǐng)輸入貨號(hào):
請(qǐng)輸入批號(hào):
摩爾濃度計(jì)算器 （本計(jì)算器可幫助您計(jì)算出特定溶液中溶質(zhì)的質(zhì)量、溶液濃度和體積之間的關(guān)系）
摩爾濃度計(jì)算公式：質(zhì)量 (g) = 濃度 (mol/L) x 體積 (L) x 分子量 (g/mol)
質(zhì)量（g）
=
濃度 (mol/L)
x
體積 (L)
x
分子量 (g/mol)
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