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產(chǎn)品簡介：
FIREFLYGLO螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)是一種輝光型定量檢測試劑盒，具有高靈敏度和發(fā)光信號穩(wěn)定的特點(diǎn)，可以滿足高通量檢測螢光素酶在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)。相對于美侖閃光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit（MA0517），本品FIREFLYGLO Luciferase Reporter Assay Kit（MA0519）具有以下優(yōu)點(diǎn)：采用了一種全新的螢光素酶檢測底物，提高了發(fā)光信號的穩(wěn)定性，近乎2小時的信號半衰期為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供了更大的靈活性；采用加樣-混勻-檢測的操作方法，無需依賴自動進(jìn)樣器，并且無需棄培養(yǎng)液、離心等步驟，簡化了實(shí)驗(yàn)流程；本試劑盒組分做了大量優(yōu)化，與傳統(tǒng)閃光型產(chǎn)品相比，無明顯刺激性氣味。FIREFLYGLO螢光素酶報告基因檢測試劑盒可用于多種常用細(xì)胞培養(yǎng)液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均為2小時左右（22℃），滿足絕大多數(shù)高通量實(shí)驗(yàn)需求。

使用說明：

1.自備材料
  PBS；多道排槍；白色不透光細(xì)胞培養(yǎng)板；化學(xué)發(fā)光儀或酶標(biāo)儀。
2.檢測前準(zhǔn)備
1）首次使用時將FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer一次性全部倒入FIREFLYGLO Luciferase Substrate瓶中，充分混勻后，按使用需求進(jìn)行分裝，建議-70℃長期保存或者短期存放于-20℃不超過一個月，并盡快使用。
2）每次實(shí)驗(yàn)前將分裝后凍存的檢測試劑平衡至室溫。
3.操作方法
1）從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)板，放置5-15min，恢復(fù)至室溫。
注：使用白色不透光的細(xì)胞培養(yǎng)板，減少孔間的信號干擾。
2）加入檢測溶液
使用多道排槍向每個細(xì)胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer，加樣體積與細(xì)胞培養(yǎng)液體積相同。例如，96孔板通常加入80-100ul培養(yǎng)液，相應(yīng)加入80ul-100ul檢測溶液；384孔板通常加入20-30ul培養(yǎng)液，相應(yīng)加入20-30ul檢測溶液。
3）振蕩混勻
為了使得細(xì)胞裂解充分，建議將細(xì)胞培養(yǎng)板放在振蕩混勻儀或附帶振板功能的儀器上，室溫條件下，采用中高速振板5-10min。
注：建議振板混勻時間為5-10min，可根據(jù)細(xì)胞量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，確保細(xì)胞充分裂解，得到穩(wěn)定的發(fā)光檢測結(jié)果。
4）檢測
振板混勻后于化學(xué)發(fā)光儀或酶標(biāo)儀中檢測Firefly Luciferase報告基因活性。
注：為得到最佳檢測結(jié)果，請?jiān)诩尤霗z測試劑后2小時內(nèi)完成檢測。

注意事項(xiàng)：
1、檢測儀器選擇：能夠檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用本試劑盒的檢測，但是針對相同的樣品，不同檢測器本底信號值和測量值均可能不同；且對于同一樣本檢測，不同儀器的數(shù)值不可橫向比較。為防止孔間干擾，推薦使用不透明白色細(xì)胞培養(yǎng)板。
2、由于發(fā)光信號會受到檢測環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響，所以應(yīng)確保同組內(nèi)不同樣本檢測條件一致。
3、酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，加樣檢測前務(wù)必將檢測試劑以及細(xì)胞培養(yǎng)板平衡至室溫。
4、為保證螢光素酶檢測試劑穩(wěn)定性，適量分裝后建議-70℃長期避光保存或者短期存放于-20℃不超過一個月，并盡快使用，盡量避免多次反復(fù)凍融。
5、如需同時檢測多個細(xì)胞培養(yǎng)板，請盡量確保每個細(xì)胞板加入檢測溶液后孵育時間一致，再進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取，以此獲得最佳的檢測結(jié)果。

保存條件：

全新試劑盒-20℃保存，一年有效；
溶解分裝后的FIREFLYGLO Luciferase Substrate于-70℃避光保存一年，或-20℃短期保存不超過一個月。

運(yùn)輸條件：-10℃干冰運(yùn)輸。

數(shù)據(jù)展示

圖1. FIREFLYGLO發(fā)光體系在光強(qiáng)、穩(wěn)定性以及線性效果對比P進(jìn)口品牌。(A) 螢光素酶濃度-光強(qiáng)-時間標(biāo)曲三維圖。在一定濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線統(tǒng)計(jì)顯示為一個截面，說明meilunbio的FIREFLYGLO發(fā)光體系在2h以內(nèi)任一時刻的線性良好。(B) meilunbio的FIREFLYGLO螢光素酶報告基因檢測試劑盒對比P 進(jìn)口公司最新版本，在絕對光強(qiáng)和穩(wěn)定性方面非常接近。(C) 單一時刻光強(qiáng)-Firefly螢光素酶濃度標(biāo)曲線性良好（R2=0.9994）。

 
圖2. FIREFLYGLO發(fā)光體系在不同培養(yǎng)基發(fā)光及半衰期驗(yàn)證。美侖FIREFLYGLO發(fā)光體系在常用培養(yǎng)基如：DMEM、RPMI1640、DMEM/F12、MEMα、F12等都可以正常發(fā)光；螢光半衰期在100-120min 左右，與P進(jìn)口品牌官方公布的數(shù)據(jù)相當(dāng)（此處未完全展示，可參考P公司官方網(wǎng)頁）。

 
圖3. 酚紅濃度-FIREFLYGLO螢光穩(wěn)定性驗(yàn)證。配制含有濃度梯度的PBS溶液，各自加入等量的螢火蟲螢光素酶并驗(yàn)證FIREFLYGLO 的發(fā)光穩(wěn)定性。由圖可知，meilunbio? FIREFLYGLO 對比P進(jìn)口品牌具有更好的酚紅耐受能力。

圖4. (A)細(xì)胞濃度梯度光強(qiáng)穩(wěn)定性和(B)細(xì)胞濃度-光強(qiáng)標(biāo)曲示例。在細(xì)胞培養(yǎng)基環(huán)境中，原位追蹤檢測Firefly Luciferase發(fā)光情況。由圖可知，螢光穩(wěn)定性和絕對光強(qiáng)與P進(jìn)口品牌差異不大；而且，單一時刻光強(qiáng)-細(xì)胞數(shù)標(biāo)曲線性良好（R2=0.9993）。

 

 
圖5. 293T細(xì)胞中TNFα 濃度梯度誘導(dǎo)NF-κB通路檢測效果美侖對比P進(jìn)口品牌。(A) 歸一化處理后，由圖可知TNFα濃度梯度在2h以內(nèi)各個時刻均保持著相對一致的誘導(dǎo)關(guān)系；并且隨著時間進(jìn)行，這種誘導(dǎo)關(guān)系并無明顯變化。(B) 單一時刻TNFα 濃度梯度誘導(dǎo)NF-κB通路效果美侖對比P進(jìn)口品牌，結(jié)果無顯著性差異。

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